用于檢測細胞內(nèi)多胺的熒光試劑PolyamineRED

用于檢測細胞內(nèi)多胺的熒光試劑PolyamineRED

PolyamineRED是一種與多胺特異性反應(yīng)，并向多胺添加紅色熒光色素TAMRA的試劑。不與單胺或氨基酸反應(yīng)。由于本產(chǎn)品可用于活細胞，因此能夠簡單地檢測出細胞內(nèi)多胺并進行半定量。

※本產(chǎn)品基于國立研究開發(fā)法人 理化學研究所 開拓研究本部 田中生體機能合成化學研究室的研究成果商品化。

※本產(chǎn)品僅供科研使用。不可應(yīng)用于臨床。

PolyamineRED擁有細胞膜透過性，在細胞內(nèi)與多胺發(fā)生反應(yīng)并將TAMRA偶聯(lián)至多胺。由于TAMRA與多胺結(jié)合后會失去膜透過性，所以可以通過清洗去除未反應(yīng)的PolyamineRED，因此可選擇性實現(xiàn)細胞內(nèi)多胺的可視化。已知多胺會在癌細胞中過量產(chǎn)生，所以使用PolyamineRED可以檢測出癌細胞中重要的多胺信號。詳情請參考應(yīng)用實例。

◆多胺是什么

多胺是含有兩個或以上氨基的直鏈烷基胺的總稱。已從生物體中鑒定出各種結(jié)構(gòu)的多胺，主要為腐胺（putrescine），亞精胺（Spermidine）和精胺（Spermine）。以亞mM~mM的高濃度存在于哺乳動物、微生物、植物的細胞中。

據(jù)報導，它在生理pH下顯示聚陽離子性，并通過與DNA / RNA和蛋白的相互作用呈現(xiàn)出各種生理活性。由于癌細胞中多胺合成基因ornithine decarboxylase (ODC)的過表達會引起多胺的過量產(chǎn)生，因此多胺有望成為癌癥標記物。但是，由于多胺的結(jié)構(gòu)簡單因而難以分析，僅限于通過HPLC的低通量分析。

另外，分析多胺必須在細胞破裂后進行去除蛋白和其他小分子的前處理，所以可能會因前處理產(chǎn)生偏差。因此，無需前處理便可在活細胞內(nèi)定量多胺的方法備受期待。

PolyamineRED為理化學研究所 田中主任研究員等所開發(fā)的新型多胺檢測試劑，是一款特異性標記細胞內(nèi)多胺的TAMRA并使其可視化的多胺檢測試劑。

多胺在生物體內(nèi)合成的路徑

◆特點

●　PolyamineRED是一款利用ganansuan炔丙基酯與多胺特異性且快速反應(yīng)的試劑。可通過在多胺標記TAMRA使細胞內(nèi)多胺可視化。

●　可用羅丹明濾光片組觀察（激發(fā)/發(fā)射波長：560 nm/585 nm）。

●　對多胺（腐胺，亞精胺，精胺）顯示高特異性，幾乎不與氨基酸或單胺反應(yīng)。

●　擁有細胞膜透過性，可用于活細胞的多胺檢測。可通過清洗去除未反應(yīng)試劑，而多胺-TAMRA復合物因多胺的聚陽離子性保留在細胞內(nèi)。

●　無需前處理，僅需簡單地操作即可檢測細胞內(nèi)多胺。

●　可通過細胞內(nèi)熒光強度半定量多胺總量。*

●　可觀察細胞內(nèi)多胺的分布情況。

* 由于可檢測出多胺總量，所以無法定量單個多胺種類。

◆應(yīng)用

●　細胞內(nèi)多胺的半定量

●　評價多胺在細胞內(nèi)的分布情況

◆原著論文

K. Vong, K. Tsubokura, Y. Nakao, T. Tanei, S. Noguchi, S. Kitazume, N. Taniguchi, K. Tanaka, Chem. Commun., 53, 8403～8406 (2017)."Cancer cell targeting driven by selective polyamine reactivity with glycine propargyl esters."

◆操作方法概要

1. 添加終濃度10~30 μM的PolyamineRED至新制備的培養(yǎng)基中。

2. 去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基，使用PBS清洗兩遍。

3. 添加含有PolyamineRED的培養(yǎng)基。

4. 培養(yǎng)10 min以上。

5. 使用PBS清洗細胞三遍。

6. 甲醛固定后，進行任意染色并觀察。

※甲醇固定可能會導致多胺成分泄漏出細胞外，因此不建議使用甲醇固定。

◆應(yīng)用實例

癌細胞與非癌細胞的多胺檢測

使用30 μM的PolyamineRED處理3種癌細胞（MCF7，MDA-MB-231，SK-BR-3）與2種非癌細胞（MCF10A，淋巴球）10 min，使用PBS清洗三遍，在DAPI染色后用福爾馬林固定細胞。在癌細胞中觀察到了TAMRA信號。另一方面，由于非癌細胞中的多胺數(shù)量較少，因此在MCF10與淋巴球中幾乎檢測不出TAMRA信號。

多胺在細胞內(nèi)的分布

使用30 μM的PolyamineRED處理MDA-MB-231 10 min后進行DAPI染色并固定細胞。在MDA-MB-231中，細胞核內(nèi)檢測出的多胺比細胞質(zhì)多。使用PolyamineRED，可以評價細胞內(nèi)多胺的分布情況。

參考：gan氨酸炔丙基酯的多胺特異性

使用HPLC追溯gan氨酸炔丙基酯的模型分子（Benzyloxycarbonyl glycine propagyl ester）與多胺（腐胺，亞精胺，精胺），氨基酸以及單胺的反應(yīng)。

僅與多胺（精胺，亞精胺，腐胺）發(fā)生反應(yīng)，而對單胺（腎上腺素）和氨基酸（賴氨酸）幾乎不反應(yīng)。由此可知，氨基數(shù)越多，對多胺的反應(yīng)性越高。（引用：原著論文）

※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。